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PPA制備與使用的基本技術(shù)

（1）       將初步純化的SPA與HRP用過碘酸鈉氧化法（交聯(lián)反應(yīng)時間在22℃下5h）交聯(lián)。

（2）       將上述PPA溶液過Sephadex G-100柱，條件同前。所收集的第1管至第22管的合并液，是PPA存在的主要組分，可用ELISA塑料平板法檢測活性。將合并液濃縮，然后加入30%左右甘油，貯于4℃冰箱備用

     PPA的使用

（1）  PPA-ELISA法?；旧吓cELISA法相同，PPA代替了酶標抗抗體。在進行微量反應(yīng)板測定時，PPA常常加入0.1ml,稀釋度一般在1：2至1：100（應(yīng)按不同情況試驗）。PPA與IgG是化學共價結(jié)合，反應(yīng)時間不宜過長，不應(yīng)超過2h，控制在30min-60min,反應(yīng)時間過長會使PPA吸附到塑料載體上去。

（2）    用PPA進行組織內(nèi)有關(guān)抗原的定位。甲醛對PPA有顯色影響，因此組織不可用甲醛固定，可用甲醛、乙醇等。PPA對組織內(nèi)抗原（先與IgG結(jié)合）的定位，反應(yīng)時間可以延長，便于滲透入組織細胞內(nèi)，且沒發(fā)現(xiàn)嚴重的物理吸附現(xiàn)象。

（3）    在PPA實驗中稀釋液常用含0.5%（v/v）Tween20的0.02mol/L Ph 7.4 Tris-HC1緩沖液（2.42gTris溶于蒸餾水后用0.1N HC1調(diào)pH至7.4，然后加蒸餾水定容至1000ml,zui后加0.5ml Tween 20）。